Hieff Canace® II High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成,其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性,保真性。耐热温度达到98℃,保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,普通Pfu DNA聚合酶的6倍。该酶主要为NGS文库扩增所设计,克服了扩增不同GC含量模板带来的GC-bias,同时扩增效率比第一代的Canace高1.5倍,文库扩增产量大幅增加。本产品配备了单独的buffer,并增加了特殊的扩增促进剂,具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性。
- 保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,普通Pfu DNA聚合酶的6倍;;
- 非常适合用于NGS文库扩增,克服了扩增不同GC含量模板带来的GC-bias,文库扩增产量大幅增加。
冰袋运输。-20°C保存,有效期2年。
Q:Canace 具有保真性的原理是?错配率是多少?能保证不突变吗?
A:a)原理是具有 3’-5’的核酸外切酶活性,即有校正功能。
b)Taq 酶错配率:2*10-4,0.0002,大约 5kb 有一个碱基发生突变。Canace 约 0.00039%, 是 taq 酶的 52 倍。
c)高保真酶是突变概率低,但不是绝对的不突变。
Q:Canace 高保真酶是否为热启动高保真酶?
A:暂时不是热启动,后续会有热启动高保真酶。
Q:Canace 扩增产物是平末端吗?
A:是。因为高保真酶具有 3’-5’的核酸外切酶活性,会将 3’A 进行切除。
Q:Canace 扩增后是平末端产物,如何加 A 尾?
A:仅供参考:先对平末端 PCR 产物纯化后,浓度要求至少 20ng/ ul(跑胶图像条带清晰,明亮即可),取 14.5 ul PCR 产物,加入 2 ul Taq Buffer,3ul dNTP,0.5 ul Taq 酶,在 72℃反应 10~20min, 后直接回收纯化加 A 尾的DNA 片段。
Q:XX 品牌的高保真酶产品能用Canace 替代吗?
A:高保真酶都可以替代。只是在某些具体参数上有些区别。
Q:Canace 可以用于酵母菌液呢?
A:不建议用。若要用则需通过煮沸,反复冻融,加蜗牛酶等等处理方法破壁后尝试。
Q:Canace 能否用于 XX 长度的片段?
A:验证范围内长度理论上是可以的(验证范围:简单模板 20kb,复杂模板 10kb)。但具体能否扩出,还与模板和引物等有关。
Q:Canace 是否适合做多重 qPCR?
A:未验证过多重。
Q:Canace 的相关应用是?
A:平末端克隆,点突变,高保真性PCR。