tyc234cc 太阳成集团MycAway®支原体qPCR检测试剂盒（探针法）(2G)是基于NAT (nucleic acid amplification techniques)的一种快速定性检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治疗用细胞中潜在支原体污染的产品。
该试剂盒基于定量PCR技术，采用多重PCR的方法，使用2种荧光探针，FAM和CY5，分别检测目标序列和内参。相较40618ES货号的支原体qPCR检测试剂盒，该2G版本可覆盖多达183种支原体DNA序列，所需待测样本的模板量也减少了一半，还可兼容更多品牌的qPCR仪器。
同时，MycAway®支原体qPCR检测试剂盒（探针法）(2G)也严格按照EP 2.6.7进行专属性、检测限、耐用性的全面验证，检测限满足≤10 CFU/mL的要求。同时覆盖USP、JP、WHO、ChP等中要求验证的支原体菌株类型，试剂盒性能符合中外法规要求，助力生物医药客户的药物研发项目临床实验申请等的顺利受理。
产品资质
符合法规：按照EP2.6.7、JP G3和USP 63药典要求验证，符合国际权威机构的标准；
配合审计：产品生产符合ISO13485质量体系标准，有完善的审计文件；
保障品质：试剂盒所需酶原料全自产，且已产业化，供货稳定；
技术经验积累：TaqMan法有技术沉淀，Kit灵敏度可达10CFU/mL及以下；
专注产品性能：Taq酶抗体库，双封闭抗体提高了Kit特异性、灵敏度、稳定性。
检测种类多：优化的TaqMan探针可检测多达183种支原体；
操作简便：样本制备和检测总时长<3h，无需培养法的28天等待；
灵敏度高：检测限达到可以替代直接培养法的10CFU/mL，甚至低至1CFU/mL及以下；
专属性强：验证了多个亲缘关系物种、常用细胞系和样本基质等，均无交叉反应；
安全性高：试剂盒内阳性对照(PC)无感染性，完全消除污染风险；
防干扰强：引入内部质控(IC)，可排除样本干扰、反应配制异常等因素，有效避免假阴性。
1. 检测限
根据标准菌株使用说明书以及提取和检测试剂盒说明书，对10CFU/mL支原体标准菌株进行核酸提取以及检测。对10CFU/mL支原体标准菌株进行检测，共得到24个检测数据。每次实验同时进行NCS、NTC样品检测。
结果表明：NCS、NTC结果合格，所有24个10CFU/mL样品的检测结果均为阳性，满足24次检测中至少有23个检测结果为阳性的要求。
表1. 验证菌株信息
| 编号 | 支原体名称 | 菌液浓度 |
| 1 | Mycoplasma arginini精氨酸支原体 | 10 CFU/mL |
| 2 | Mycoplasma orale口腔支原体 | 10 CFU/mL |
| 3 | Mycoplasma gallisepticum鸡败血支原体 | 10 CFU/mL |
| 4 | Mycoplasma pneumoniae肺炎支原体 | 10 CFU/mL |
| 5 | Mycoplasma synoviae关节液支原体 | 10 CFU/mL |
| 6 | Mycoplasma fermentans发酵支原体 | 10 CFU/mL |
| 7 | Mycoplasma hyorhinis猪鼻支原体 | 10 CFU/mL |
| 8 | Acholeplasma laidlawii莱氏无胆甾原体 | 10 CFU/mL |
| 9 | Spiroplasma citri柠檬螺原体 | 10 CFU/mL |
| 10 | Mycoplasma salivarium唾液支原体 | 10 CFU/mL |
表2. 检测限结果
| 10 CFU/mL | 实验1 | 实验2 | 实验3 |
| 检出率 | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| 总 | 24/24 | ||
Mycoplasma arginini 精氨酸支原体 10CFU/mL 浓度样品，分三次检测，每次8重复，总检测结果满足 24 次中≥23 个检测结果为阳性。下述展示了三次中的一次实验数据：
表3. 精氨酸支原体的检测结果
| 样品 | FAM Ct | CY5 Ct | 结果判读 |
| Mycoplasma arginini 10 CFU/mL | 33.36 | 26.96 | 阳性 |
| 33.28 | 26.96 | 阳性 | |
| 33.60 | 26.95 | 阳性 | |
| 33.57 | 27.00 | 阳性 | |
| 33.81 | 27.26 | 阳性 | |
| 33.48 | 27.12 | 阳性 | |
| 33.77 | 27.02 | 阳性 | |
| 32.20 | 26.88 | 阳性 | |
| NCS | / | 27.22 | 合格 |
| NCS | / | 27.32 | 合格 |
| NTC | / | 27.26 | 合格 |
| NTC | / | 26.92 | 合格 |
| 支原体通道 | IC通道 | ||
 |  | ||
2. 专属性
交叉反应：选取了14种非柔膜菌纲的菌株、6种生物医药常用的工程细胞的DNA，采用本支原体qPCR试剂盒进行支原体检测。检测结果得出：支原体目的通道均无起峰，内参IC正常扩增。
表4. 共20种菌株和工程细胞的支原体检测结果
| 编号 | 样品名称 | 结果 | 编号 | 样品名称 | 结果 |
| 1 | 表皮葡萄球菌 | 阴性 | 11 | 白色假丝酵母 | 阴性 |
| 2 | 产气荚膜梭菌 | 阴性 | 12 | 肠沙门氏菌肠炎亚种 | 阴性 |
| 3 | 丙酮丁醇梭菌 | 阴性 | 13 | 枯草芽孢杆菌 | 阴性 |
| 4 | 鲍曼不动杆菌 | 阴性 | 14 | 蜡状芽孢杆菌 | 阴性 |
| 5 | 嗜酸乳杆菌 | 阴性 | 15 | HEK293 DNA | 阴性 |
| 6 | 产气肠杆菌 | 阴性 | 16 | Vero DNA | 阴性 |
| 7 | 藤黄微球菌 | 阴性 | 17 | CHO DNA | 阴性 |
| 8 | 变异链球菌 | 阴性 | 18 | E.coli DNA | 阴性 |
| 9 | 铜绿假单胞菌 | 阴性 | 19 | 293T DNA | 阴性 |
| 10 | 肺炎链球菌 | 阴性 | 20 | SF9 DNA | 阴性 |
3. 支原体qPCR试剂盒产品性能验证总结
表5. 支原体qPCR检测试剂盒性能验证内容和结论
| 性能 | 验证参数 | 试剂盒验证结果 |
| 检测限 | 支原体菌株检测限 | 10种法规药典要求的支原体10CFU/mL，分别检测24次，检出率≥95% |
| 专属性 | 样本基质干扰 | 检测了9种样本基质和DNA稀释液，均未检出支原体 |
| 交叉反应 | 检测了14种菌株、6种生物医药常用工程细胞，均未检出支原体 | |
| 耐用性 | 冻融稳定性 | 可经受反复20次冻融，试剂盒性能不受影响 |
| 热加速稳定性 | 37℃条件下14天和4℃条件下30天，试剂盒性能不受影响 | |
| 仪器适用性 | 适用ABI7500、ABI QuantStudio™5、Bio-Rad CFX96、罗氏LightCycler®480 | |
| 覆盖度 | 覆盖支原体DNA种类 | 通过支原体16SrRNA序列进行数据库比对，覆盖183种柔膜菌纲物种 |
表5. 支原体qPCR检测试剂盒性能验证内容和结论
-25~-15℃保存，有效期2年。
*收到货后，请检查各组分是否齐全，如不立即开封各组分做实验，需立即放入-25~-15℃中保存。注意40619-B需要避光保存。
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