鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd=20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å, 分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1 µg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品为iFluorTM 700标记的鬼笔环肽,染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。iFluorTM 700鬼笔环肽染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容,包括荧光蛋白、Qdot®纳米晶体和其他iFluorTM 偶联物(包含iFluorTM 偶联二抗)。另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。
本品以粉末小颗粒形式提供,请加入30 uL DMSO并充分混合。
货号 | 40789ES75 |
规格 | 300 T |
分子量 | ~3000 |
最大激发/发射波长(Ex/Em) | 690/713 nm |
溶解性(Solubility) | 溶于DMSO |
冰袋运输,-25~-15℃保存,有效期1年。
Q: 为什么激发后荧光很快就猝灭了?
A:1.可能是使用浓度过高造成,可以再适当降低一些试剂浓度;可以在寻找视野时使用低能量的激光,待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。2.鬼笔环肽不能和点击反应(例:EDU)共染色,否则鬼笔环肽没荧光信号。
Q: 每次是添加多少试剂量(工作液)进行荧光显微镜检测?
A: 建议添加的量是能够完全浸没细胞即可,不同的细胞染色情况不同,相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。
Q: 可以用哪些溶液来固定细胞,需要注意什么?
A: 可以用溶于PBS的4%多聚甲醛溶液进行细胞固定,固定时避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。
Q: 为什么用鬼笔环肽结合 F-actin 标记石蜡切片,没有看到信号?
A: 当细胞和组织经由二甲苯或丙酮之类的溶剂处理时(例如组织切片脱石蜡期间),它通过阻止鬼笔环肽结合的方式来影响F-actin。可以使用通常不用有机溶剂洗涤的冷冻切片代替石蜡切片,或者可以使用抗肌动蛋白抗体。
Q: 鬼笔环肽染色 F-Actin, 有的染上,有的没染上,并且染色信号较弱?
A: 1.摸索鬼笔环肽最佳染色工作液浓度及染色时间。2.细胞未固定好,建议使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定。3.细胞未透化彻底,透化时间可相应延长。