Hieff NGS® OnePot II DNA Library Prep Kit for Illumina®是针对Illumina®高通量测序平台专业开发设计的新一代酶切法建库试剂盒。与传统的建库法比较，本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。本试剂盒具有优秀的文库转化率，可应用于常规动植物基因组、微生物基因组等样本，同时能兼容FFPE DNA样本的建库。经测序验证，不同GC含量的样本，均可获得优异的测序结果，文库覆盖度高，均一性好，偏好性低，使建库变得更加简单高效。
- 适用500 pg-1 μg的基因组DNA、全长cDNA等样本。
- 高质量片段化酶，可随机切割双链DNA，酶切片段无偏好性。
- 片段化、末端修复/加A一步完成。
- 强扩增效率的高保真酶，显著提高文库质量及产量。
- 适用于FFPE DNA样本。
- 严格的批次性能与稳定性质控。
OnePotII DNA 建库试剂盒酶切 800 ng 小牛胸腺 gDNA 样本（不同酶切时间片段化效果检测）
使用本试剂盒进行 human gDNA 样本建库，文库进行电泳检测（Input DNA 为 500 ng，酶切 20 min，扩增 5 cycles）
-25~-15℃保存。
Q: 酶切法建库试剂盒针对哪些样本建库效果比较好？
A：OnePot/OnePot II DNA 建库试剂盒针对基因组DNA 和 cDNA 均可获得高产高质的文库。案例展示为 12204 应用于cDNA 文库构建（ds-cDNA） 背景：客户得到逆转录的ds-cDNA，全长 1.1kb 左右，想酶切至 300 bp 左右。 结论：Input DNA 50 ng 左右，酶切 4-10 min，PCR 8Cycles，产量>3μg,若需要更集中的文库，可进行双轮分选。 Q:gDNA 片段化参考说明书酶切条件酶切 20 min，竟然切不动？ A:一般优先考虑 DNA 的质量问题，比如 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐离子，可能会影响酶切效果，建议将 DNA 稀释在 ddH2O 或不含 EDTA 的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中再进行片段化。其次，如果样本是反转录得到的全长 cDNA，则需考虑样本纯度问题。另外，对于环状DNA 的酶切，需要另行摸索酶切时间体系。特殊样本可考虑磁珠纯化之后进行酶切或适当延长酶切时间。 Q:酶切时间也不长，竟然过度酶切了? A:以插入片段 300 bp 为例，白细胞 gDNA，30 度酶切 10min，出现如下图过度酶切现象。建议参考酶切条件需要考虑不同样本 gDNA 大小，如白细胞 gDNA 较小，应适当缩短酶切时间，否则易出现如下过度酶切现象。
Q:酶切法建库，如何做到较好的质量控制？
A:1）文库浓度检测，qubit 法或qPCR ； 2）文库长度检测，琼脂糖凝胶电泳测定；
2）文库质量鉴定，Agilent 2100/2200；
3）文库大小分布、引物二聚体和过扩增产物的缺失，应通过电泳方法进行确认.构建优异的DNA 文库，除了明确以上因素之外，还需要选择高质量的建库产品。翊圣生物为满足广大科研工作者的 NGS 建库实验需求，推出了 NGS 建库整体解决方案， 方便大家根据实验需求进行选择。
[1] Liu K, Deng S, Ye C, et al. Mapping single-cell-resolution cell phylogeny reveals cell population dynamics during organ development. Nat Methods. 2021;18(12):1506-1514. doi:10.1038/s41592-021-01325-x(IF:47.990)
