Catalase Assay Kit 过氧化氢酶检测试剂盒是一种简单快速、可通过测试吸光度来检测动物血清、血浆、组织以及全血、红细胞、培养细胞、培养液中的过氧化氢酶（CAT）的活力。过氧化氢酶（CAT）催化H₂O₂分解为水和氧气，当加入钼酸铵后，反应迅速终止，剩余的H2O2与试剂盒中的钼酸铵发生络合反应，得到淡黄色的产物。这个黄色产物的最大吸收波长是405 nm 。所以，可以通过检测405 nm处的吸光度，来测定样品中的过氧化氢酶（CAT）的活力。

^{羟基自由基（OH-）是很活泼的活性氧，它能与细胞内的许多有机物、核酸、有机酸等等发生氧化反应，破坏性极强。过氧化氢酶（CAT）广泛分布在血清、血浆、红细胞等中，能分解活性氧，保护细胞免受破坏，因而测定过氧化氢酶（CAT）的活力至关重要。}

组分信息

使用说明

1. 溶解试剂三：向试剂三（显色粉剂）中加入100 mL的双蒸水溶解；放入2～8℃冰箱避光保存。（如果底部有不溶的粉末沉淀，直接取上清即可，不影响实验结果）
2. 预热：实验之前，先将试剂盒中的试剂一和试剂二放在37 ℃水浴锅中预热10～20 min，以备后用。
3. 加样品，检测吸光度：

A. 血清、血浆样本吸光度检测：

B. 全血、红细胞样本吸光度检测：

1) 1：99溶血液配制：向50 μL全血或红细胞样本中加双蒸水至5 mL，混匀，放置10 min，待测；

2) 检测吸光度：

C. 组织样本吸光度检测：

1) 组织匀浆液制备：按组织重量（g）：生理盐水体积（mL）=1:9的比例，在冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500 r/min离心10 min，取上清；再用生理盐水稀释到最佳取样浓度，一般稀释成：5%、2%、1%、0.5%、0.25%、0.1%等不同的取样浓度，其中小鼠肝脏匀浆取样浓度为0.25%～1%。

2) 检测吸光度：

4. 过氧化氢酶活力计算

_{A. 血清、血浆中过氧化氢酶（CAT）活力计算（每毫升血清或血浆每秒钟分解1 μmol H2O2的量为一个活力单位）}

血清中过氧化氢酶活力（U/mL）=（对照组OD值－实验组OD值）××样本测试前稀释倍数

_{B. 血红蛋白中过氧化氢酶（CAT）活力计算（每毫克血红蛋白每秒钟分解1 μmol H2O2的量为一个活力单位）}

溶血液中过氧化氢酶活力（U/mgHb）=（空白对照组OD值＋自身对照组OD值－实验组OD值）×÷血红蛋白浓度（mgHb/mL）

C. _{组织匀浆中过氧化氢酶（CAT）活力计算（每毫克组织蛋白每秒钟分解1 μmol H2O2的量为一个活力单位）}

组织匀浆中过氧化氢酶活力（U/mgprot）=（对照组OD值—实验组OD值）×      ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/mL）

注意事项

1. 加入试剂一和试剂二之前，要进行37 ℃预热。
2. 试剂三溶解、保存后，使用前有沉淀，直接取上清即可，不影响实验结果。
3. 当天冷时试剂四会凝固，使用前37 ℃水浴加热至透明即可。

2～8 ℃避光保存，保质期6个月。

Q: 试剂的4个组分分别是什么？

A：试剂一是缓冲液，试剂二是底物，试剂三是显色剂，试剂四是稳定剂。

Q：如果客户检测的样本是培养的细胞，细胞裂解后的裂解液可以按照组织匀浆的加样比例做吗？不能的话有没有培养细胞的检测方法？

A: 如果检测的样本是培养的细胞，细胞裂解后的裂解液可以按照组织匀浆的加样比例。

Q:组织匀浆的检测中，为什么对照组还需要加组织匀浆，而不是直接加水？

A：对照组也需要按照步骤添加组织的样本，排除样本自身的干扰。

Q: 双蒸水调零是什么意思？

A: 分光光度计比色皿装水调零。

Q：血清血浆检测需要稀释吗？使用什么稀释呢？

A：直接检测就可以。

Q:使用什么仪器进行检测呢？

A：使用分光光度计或者反应之后取200ul用酶标仪检测。

Q: 这个光径0.5cm 是什么意思？

A: 这里的光径0.5cm是指比色皿规格是0.5cm*1cm的。

Q: 如果是酶标仪该怎么设置？

A: 如果是酶标仪就不用设置光径和双蒸水调零这么复杂。只需要405nm检测就可以了。

Q：酶标仪检测结果，计算公式还是按照说明书的公式吗？

A：计算公式中的常数271需要更改为常数235.65，其余的不需要改变。