Hieff NGS® In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina 是针对Illumina®高通量测序平台研发的用于CUT&Tag实验的文库构建试剂盒，适用于100-100,000个细胞起始量的样本建库。CUT&Tag是研究蛋白与DNA互作的技术，相较于传统的ChIP-seq、CUT&RUN，该技术具有文库构建时长更短（仅需7小时）、操作更简单、对起始样本要求更低、抗体投入量更少、文库产量更高等优点。经过细胞捕获、一抗孵育、二抗孵育、转座酶孵育、转座酶激活、掺入DNA标准品、细胞裂解、磁珠回收gDNA、文库扩增和磁珠分选等步骤，靶蛋白结合的DNA片段最终转化为适用于Illumina®平台测序的文库。
本试剂盒包含两个独立模块：BOX-I和BOX-II。BOX-I包含结合细胞的ConA Beads、提取DNA 的DNA Extract Beads以及文库纯化的DNA Selection Beads，BOX-II包含细胞透化剂、抗体结合buffer、转座酶结合buffer、蛋白酶K以及后续文库扩增所需的所有试剂。此外，本试剂盒已在不同种类细胞（如293T、K562、CHO、ESC细胞等）中进行了验证，均具有良好的建库效率和建库产量。本试剂盒提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库的稳定性和重复性。
- 实验操作简单、实验周期短：建库一步法，节省建库时间；ConA使用，无需离心转管；无需超声片段化；样本投入量低。
- 实验重复性好
产品应用：蛋白质-DNA互作研究：组蛋白修饰调控、转录因子调控等表观作用机制研究。
一、组蛋白修饰H3K27me3和H3K4me3 的DNA结合图谱建库
分别使用Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb（Cell Signaling Technology Cat#9733）、Histone H3K4me3 antibody (pAb)（Active Motif Cat# B_2615077）和Normal Rabbit IgG（Cell Signaling Technology Cat#2729）作为一抗、Guinea Pig anti-Rabbit IgG (Heavy & Light Chain) antibody作为二抗（antibodies-online Cat#ABIN101961），使用Hieff NGS® G-Type In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina®对100-1,000,000个293T细胞投入量样本建库，并分别使用1.2×磁珠进行纯化，再使用0.6×和0.4×磁珠分选，文库大小结果使用Qsep和2%琼脂糖凝胶电泳进行检测。
图 Qsep和琼脂糖凝胶电泳进行文库质量分析
二、不同细胞投入量的H3K27me3的 DNA结合图谱建库测序
使用Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb作为一抗（Cell Signaling Technology Cat#9733）、Guinea Pig anti-Rabbit IgG (Heavy & Light Chain) antibody作为二抗（antibodies-online Cat#ABIN101961），使用Hieff NGS® G-Type In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina®对100-1,000,000个293T细胞投入量样本建库，并分别使用1.2×磁珠进行纯化，结果使用Qsep进行检测。文库测序后与ENCODE中的H3K27me3 ChIP-seq数据进行比较。
图 Qsep对不同细胞投入量文库质量分析
图 利用本试剂盒鉴定不同细胞投入量条件下H3K27me3在染色质上的信号分布和相关性
BOX-I：2-8℃保存，BOX-II：-25~-15℃保存。
