本品细胞/组织裂解液，WB/IP裂解液，是一种非变性条件下的裂解液，含有sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、sodium orthovanadate和leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解，并能维持原有的蛋白间的相互作用。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。
太阳成集团为您提供Western Blot实验整体解决方案，相关产品选购请参考：WB实验系列产品-选购指南
1.适用性广：几乎适用于所有实验室培养的动物细胞和各种组织。
2.使用方便：即用型配方，节省实验时间。
(一) 细胞样品
1. 融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×10⁵-1×10⁶个细胞/管，然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。
（二）组织样品：
1.把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解WB/IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。
3.按照每20 mg组织加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5.充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
冰袋（wet ice）运输。-15~-25℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。
Q：该产品可裂解哪些成分？
A：本品可用于细胞/组织裂解液，WB/IP 裂解液，是一种非变性条件下的裂解液。
Q：RIPA 裂解蛋白后，对蛋白定量是否有影响？
A：用 RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 Yeasen BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（Cat#20201ES76）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。使用其他品牌的BCA 建议参照产品说明书中对去污剂等的耐受范围。
Q：RIPA 裂解液可以用于植物和细菌吗？
A：不能。本品是动物组织和细胞专用的，植物细胞和细菌都有细胞壁，不能裂解；理论上可以加溶壁酶后再裂解，但没有尝试过。
Q：对于组织样品，充分裂解的时间与温度一般是多少？
A：4 度或冰上裂解，时间没有要求，具体实验具体分析，一般细胞是充分裂解后应没有明显的细胞沉淀，织的话用用匀浆器匀浆，直至充分裂解呈匀浆状态。
- Zhang Y, Li Z, Liu X, et al. 3-Hydroxybutyrate ameliorates insulin resistance by inhibiting PPARγ Ser273 phosphorylation in type 2 diabetic mice. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):190. Published 2023 May 26. doi:10.1038/s41392-023-01415-6(IF:39.3)
- Guo X, Fu Y, Lee YJ, et al. The PGS1 basic helix-loop-helix protein regulates Fl3 to impact seed growth and grain yield in cereals. Plant Biotechnol J. 2022;20(7):1311-1326. doi:10.1111/pbi.13809(IF:9.803)
- Cao G, Li P, He X, et al. FHL3 Contributes to EMT and Chemotherapy Resistance Through Up-Regulation of Slug and Activation of TGFβ/Smad-Independent Pathways in Gastric Cancer. Front Oncol. 2021;11:649029. Published 2021 Jun 4. doi:10.3389/fonc.2021.649029(IF:6.244)
- Wang Y, Yang Z, Bao D, et al. Improving Hypoxia Adaption Causes Distinct Effects on Growth and Bioactive Compounds Synthesis in an Entomopathogenic Fungus Cordyceps militaris. Front Microbiol. 2021;12:698436. Published 2021 Jun 22. doi:10.3389/fmicb.2021.698436(IF:5.640)
