E.coli DNA ligase可以催化相邻DNA链的5“-P0₄未端与3,“-OH未端形成磷酸二酯键,对平未端底物DNA几乎无明显连接活性。其反应的最适pH为7.5-8.0 (Tris-HCL buffer),反应需NAD作为辅酶。与T4 DNA Ligase可连接粘性未端和平未端相比,本酶只能催化突出未端DNA之间的连接,但如果在PEG及高浓度一价阳离子存在的条件下,也能连接平滑未端的DNA。另外,本款产品不能催化DNA与RNA以及RNA之间的连接反应。该酶可以用于NGS甲基化建库中进行连接反应,另外也可以用于Okayama-Berg法克隆cDNA。

• 与其它使用 rATP 的连接酶不同，该连接酶以 NAD+（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）作为辅因子。
• 该酶对平末端片段的连接效率极低。建议使用 T4 DNA 连接酶连接平末端片段。
• 不能将 RNA 连接到 DNA。
• 该酶只能连接具有粘性末端的 DNA 片段。
• 65°C孵育20 minutes失活。

-25~-15℃保存，有效期1年。