HifaireVReverseTranscriptase是在HieffeM-MLV(H-)ReverseTranscriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转 录酶,与HieffM-MLV(H-)ReverseTranscriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60“C的反应温度,适合具 有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。 HifaireVReverseTranscriptase合成全长CDNA的能力也有了提升,可扩增长达10kb的CDNA。 产品信息 货号14603ES60/14603ES03/14603ES25/14603EST72 规格100KU/1,000KU/25,000KU/250,000KU 单位定义以Poly(A).Oligo(dT)为模板-引物,在37“C,10min内,将1nmol的dTTP 广定 掀入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。 组分信息 组分编号组分名称14603ES6014603ES0314603ES2514603ES72 HifaireVReverse 14603100hL1mL25mL250mL Transcriptase(1000U/HL) 储存条件 -25~-15“C保存,有效期2年。 使用说明 第一链CDNA合成操作步骤 1.RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链CDNA的产量。) 组分使用量 RNasefreeddH20to13hL Oligo(dT)s(50HMJ)1hL orRandomPrimers(50hM)or1hL orGeneSpecificPrimers(2HM)or1hL 模板RNATotalRNA:1ng-5hg或mRNA:1-500ng 65“C加热5min,迅速置于冰上冷却2min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。 Page1of2 YEASEN 2.逆转录反应体系配制(20hL体系) 组分 上一步的反应液 10XHifaireVBuffer(Cat#15661) dNTPMix(10mM) HifaireVReverseTranscriptase(1000U/KHL) RNaseinhibitor(40U/hL) RNasefreeddH20 3.逆转录程序设置 温度 25“C* 42ecs 85oCxxx 使用量 13hL 2hL 1hL 0.2hL 1hL to20hL 时间 5min 15-30min 5min *当使用RandomPrimers时,需25“C,孵育5min;若使用Oligo(dT)us或GeneSpecificPrimers,此步可省略。 *“*逆转录湿度:推荐使用42“C。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55“C。 *“*85“C加热5min,目的是使逆转录酶失活。 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20“C短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80“C保存,避免反 复冻融。 该逆转录酶也适用于一步法RTqPCR,推荐每25hL反应体系,添加10-20U逆转录酶,也可根据实际情况逐步增加逆 转录酶用量。 注意事项 .所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解。 .本产品仅用作科研用途。 n“一0【一广 .为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本。 .为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。 .请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNasefree,以防止RNasSe污染。 WwWw.yeaSsen.COm Page2of2

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。