mRNA建库试剂盒，含全套mRNA抓取以及mRNA建库试剂盒。

Hieff NGS^® Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit是兼容Illumina和MGI双平台的mRNA转录组文库构建试剂盒，本试剂盒将cDNA二链合成与Endprep、dA-tailing进行合并，极大地缩减建库时间。二链合成模块配有两种Buffer，客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。本产品适用于起始模板为10 ng-4 μg不同来源真核生物总RNA样本。经过mRNA分离、片段化、双链cDNA合成、末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增，总RNA样品最终转化为兼容Illumina^®和MGI^®平台测序的文库。

试剂盒包含两个独立模块，BOX-I的核心为纯化mRNA所需的oligo (dT)磁珠。BOX-II包含mRNA片段化试剂，反转录试剂，常规和链特异性ds-cDNA合成，以及后续建库所需的所有试剂。其中链特异性二链合成Buffer中将dTTP替换为dUTP，使cDNA第二链中掺入dUTP，而本试剂盒使用的高保真DNA聚合酶无法扩增含尿嘧啶的DNA模板，实现链特异性。提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

• 建库简便性：二链合成与末端修复，加A流程一步完成。
• 片段更集中，文库均一性好：不同片段条件对应不同大小文库，文库测序均一性好，无5’或3’偏好性。
• 投入量范围广：兼容10 ng ~ 4 μg的Total RNA投入量。
• 链特异性及非链特异性兼容：优化的扩增酶使用不同的buffer可简便得到链特异或者非链特异文库。
• 测序平台兼容：Illumina和MGI双测序平台兼容，搭配不同测序平台接头，即可完成对应平台的测序文库。

产品应用：mRNA建库

1、温和可控的mRNA片段化条件

表 mRNA片段化条件推荐

• 根据目的文库大小选择合适的片段化程序
• 根据样本质量调整片段化程序

图. mRNA不同打断时间对应的双链cDNA片段范围。以Universal Human Reference RNA(Agilent: 740000)为例。

2、不同样本文库峰型一致性较好

选用人、小鼠、小麦和拟南芥，使用同一投入量以及相同的实验条件进行mRNA建库，对比样本的文库产量以及文库峰型，最终结果显示，不同样本浓度均符合要求，且文库峰型一致性较高。

3、文库均一性较好

分析文库测序数据，看文库5端到3端的覆盖度，结果显示，建库试剂盒无偏好性，文库覆盖度很均一。

Box I：2-8°C保存。

Box II：-25~-15℃保存。