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Calcein-AM/PI Double Stain Kit Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒
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产品介绍

Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,发绿色荧光(Ex=490 nm, Em=515 nm)。 因其在传统的Calcein(钙黄绿素)基础上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基团,增加了疏水性,使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后,Calcein-AM(本身不发荧光)被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein,从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如BCECF-AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM细胞毒性极低,是最适合用于活细胞染色的荧光探针,而且不会抑制任何的细胞功能,如增殖和淋巴球的趋化性。

由于死细胞缺乏酯酶,Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此,Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶(PI)等联合使用,同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)不能穿过活细胞的细胞膜,仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(Ex=535 nm, Em=617 nm),因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发,仅可观察到死细胞。

产品特色

本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的双重染料,来进行活细胞和死细胞的双重染色标记,从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系,单次就200 µL细胞悬液进行染色,分别可以做500次(CAS: 40747ES76)和1000次(CAS: 40747ES80)检测。

存储条件

冰袋运输;其中A组分和B组分需-20℃避光干燥保存,C组分-20℃保存,经常使用可放在4℃保存。一年有效。

FAQ

Q:40747ES76 Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒 Calcein-AM/PI Double Stain Kit 共聚焦皿可以不消化吗?

A:可以的,不用消化,直接染色观察。

Q:40747ES76 Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒,做流式实验时跑什么panel?

A:钙黄绿素的颜色选择 FL1 通道,PI 的颜色选择FL3 通道。

Q:Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒,这个染料不可以直接染贴壁细胞么? 直接在六孔板上看荧光,这个可以吗?

A:不建议,对光有影响,效果不好,可以使用玻璃皿。

Q:一个细胞两种颜色均被染上,怎么判断结果呢?

A:可判定为死细胞。原因:由于死细胞缺乏酯酶或酯酶活性很低,Calcein AM进入细胞后含有酯酶的活细胞可以产生Calcein,而死细胞不能或很少能产生Calcein,因此仅活细胞会被染色为强绿色荧光,死细胞不能被染色或者染色非常弱。PI由于不能穿透活细胞的细胞膜,而只能染色细胞膜完整性被破坏的死细胞。所以被染成红色的活黄色的(绿色和红色均被染上)可以判定为死细胞,活细胞只发绿色荧光。

建议:实验前进行摸索Calcein AM和PI的染色浓度,选择合适的染色浓度

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