Dispase II，中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。
本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
产品信息
| 货号 | 40104ES60 / 40104ES80 |
| 规格 | 100 mg / 1 g |
| 比活性（Specific Activity） | ≥0.8 U/mg (+37℃, casein as substrate, pH 7.5) |
| 单位定义（Unit Definition） | 在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1 µM(181 µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。 |
| 最佳pH（pH Optimum） | 6.0-8.5 |
| 抑制剂（Inhibitors） | EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。 |
| 激活剂（Activator） | Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+浓度为2 mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其处于最佳活性。 |
使用说明
1 母液及工作液配制
1）用50 mM HEPES-KOH缓冲液(pH 7.4, 150 mM NaCl)（60165ES）溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。
2）使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
【注】不推荐使用高于2.4 U/mL的工作浓度。
2 组织的解离
1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；
2）用无菌PBS清洗组织块；
3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。
4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。
5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。
6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；
7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。
3 细胞传代
1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5 min；
2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min；
3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min；
4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；
5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。
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冻干粉4℃保存，保质期2年。储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存。避免反复冻融。
Q: 分散酶II用Hepe缓冲盐溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl), 括号中是什么意思？可以用其他缓冲液替代吗？
A: 括号内，是Hepes缓冲液的组成。建议用推荐的HEPES缓冲液溶解。其他缓冲液没有验证数据。
[1] Chen S, Liu H, Li Z, et al. Epithelial PBLD attenuates intestinal inflammatory response and improves intestinal barrier function by inhibiting NF-κB signaling. Cell Death Dis. 2021;12(6):563. Published 2021 May 31. doi:10.1038/s41419-021-03843-0(IF:8.469)
