Hieff® DNA Bisulfite Conversion Kit将DNA变性与亚硫酸氢盐转化融合为一步,3小时内即可完成转化;采用柱内脱硫技术,消除了繁琐的DNA沉淀步骤,使操作流程更为简单;可以满足500 pg-2 μg样品的转化;未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的转化率≥99.5%;同时,本试剂盒采用独特的DNA保护剂组分,使得转化后DNA的质量和回收率都有很大的保障。转化后的产物适用于PCR扩增和DNA测序等下游应用。
投入量低:可满足500 pg-2 μg样品的转化
转化效率高:转化率≥99.5%
操作简便:3小时内可完成转化
室温保存,有效期2年。
Q:如何评估 BS 转化或酶法转化的回收率?
A:转化前双链定量,转化后单链定量;或转化前变性成单链,转化前和转化后都采用单链定量;或采用 qPCR 的方法。
Q:转化过程中会把 DNA 片段化吗?
A:会片段化DNA,BS试剂会对DNA片段造成损伤、断裂,断裂是随机的,没有固定大小。
Q:Conversion之后放在4度没来得及做后续实验会有什么影响吗?
A:转化程序运行完以后可以在4度中保存20h以内。
Q:转化效率低是什么原因?
A:可能原因有:1)Conversion Reagent Mix不足或失效,检查是否配置正确或是否在有效期内,冻存过的用前需要确认涡旋混匀;2)反应温度或时间设置有误,检查确认程序设置和反应温度等;3)DNA样本投入量过高,样本投入量控制在说明书范围内,对于复杂样本的或高GC样本可以适当减少投入量或者延长转化时间。
Q:配置好的 Conversion Reagent Mix 可以保存多久?
A:可在室温(15~25℃)储存 24 h,在 4℃存储一周,冷冻条件(-20℃)储存1个月。使用时需平衡至室温,并涡旋混匀。另外该试剂对广敏感,建议现配现用。