DAF-FM DA即4-Amino-5-Methylamino-2',7'-Difluorofluorescein Diacetate，也称DAF-FM Diacetate，是最新一代用于一氧化氮（nitric oxide, NO）定量检测的探针，其检测原理为：DAF-FM DA可以穿过活细胞膜（cell-permeable），进入细胞后可以被胞浆内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF-FM。DAF-FM本身仅有很弱的荧光，光量子约0.005，但在与NO反应后生成荧光素-苯骈三氮唑（benzotriazole），发强烈绿色荧光，光量子约0.81。Ex~495 nm，Em~515 nm。任何可以检测荧光素（fluorescein）的仪器，包括荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。

DAF-FM DA是最新一代NO检测探针，与以往最成功且应用最广泛的一氧化氮荧光检测探针DAF-2 Diacetate相比较，具有多方面的改进：1）DAF-FM DA和NO加合反应形成的荧光产物在pH5.5以上不受pH影响；2）DAF-FM DA和NO加合反应形成的产物荧光更加稳定，不容易淬灭，这样更加便于检测；3）DAF-FM DA对一氧化氮的检测灵敏度更高，其最低检测浓度可达到3 nM，而DAF-2 Diacetate的最低检测浓度约为5 nM。

本品适用于检测细胞内的一氧化氮水平，推荐工作浓度为1-10 µM。如果收集细胞后再装载探针，通常至少可以检测100个样品。

-25~-15℃保存，有效期2年。

Q：DAF-FM DA可以用什么稀释为工作液？

A：DMSO稀释为储存液，PBS稀释为工作液。