TelN端粒酶(TelN Protelomerase),TelN端粒酶来自噬菌体N15,是N15复制系统的组成部分,参与线性前噬菌体DNA的生成。与真核生物的端粒酶不同,TelN是不含任何RNA成分的纯蛋白酶,具有切割-连接活性,在切割双链DNA(dsDNA)后会在酶切位点出留下共价闭合的末端。
TelN端粒酶的识别位点telRL,是一个长达56 bp的回文序列,两侧是telR和telL。靶序列中心位置同样是一个回文序列telO。TelN端粒酶在telO序列内部切割并且在2个切割末端形成共价闭合的发卡结构,酶切后的DNA载体末端依然由telR和telL组成,形似“狗骨头”(doggybone)。由于TelN端粒酶特殊的酶切-连接活性,可以经过一步酶促反应将环状质粒DNA转变成线性共价闭合的哑铃型分子。
- 切割-连接性能优异;
- 双链DNA末端闭合完整性>90%
- 切割-连接性能优异,与进口品牌相当
以含有TelN端粒酶识别位点的超螺旋质粒为模板,梯度加入(0.078-5 U)太阳成集团及进口品牌A*的TelN端粒酶将0.5 μg超螺旋质粒转换成封闭线性双链DNA,凝胶电泳检测转换效率,结果显示太阳成集团TelN端粒酶的切割-连接活性与进口品牌A*相当。
图3. TelN端粒酶切割活性检测 M:Marker,C:超螺旋质粒对照
- 双链DNA末端闭合完整性>90%
以含有TelN端粒酶识别位点的超螺旋质粒为模板,加入太阳成集团及进口品牌A*的TelN端粒酶,将0.5 μg超螺旋质粒转换为封闭线性双链DNA,再加入T5核酸外切酶通过条带降解程度来检测其末端完整性,结果显示太阳成集团的TleN端粒酶生成的双链DNA末端闭合完整性>90%,与进口品牌A*相当。
图4. TelN端粒酶末端闭合完整性检测。
C1:含TelN识别位点质粒,不加TelN端粒酶与T5核酸外切酶;
C2:含TelN识别位点质粒,加TelN端粒酶,不加T5核酸外切酶;
A*:含TelN识别位点质粒,加A*的TelN端粒酶,加T5核酸外切酶;
Yeasen:含TelN识别位点质粒,加Yeasen的TelN端粒酶,加T5核酸外切酶。
-25~-15℃保存,有效期1年。