细胞培养是生命科学研究中常见的实验。不像其它常用的实验方法，细胞培养是一个动态的连续过程，细胞通常会对操作失误或污染物有所反应，这些反应往往表现出不正常的细胞状态或培养基外观。如果受到支原体污染时，细胞形态较之无明显变化，极易被忽视，往往直到污染非常严重时才能发现。受污染的细胞膜上可能有几百个支原体，这些支原体竞争营养并释放有毒的代谢产物，严重影响实验结果。

研究表明，至少二十多种支原体能污染细胞，其中最常见的有：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）、发酵支原体（M. fermentans）、人型支原体（M. hominis）、唾液支原体（M.salivarium）、肺支原体（M.pulmonis）和梨支原体（M.pirum）等。培养细胞的支原体污染率在4%-92%不等，其污染来源包括工作环境、操作者本身（一些支原体是人体的正常菌群）、培养基、血清、细胞交叉污染、实验器材和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。

确认细胞培养过程中出现问题的潜在原因是一项困难且耗时的任务，在细胞培养中，任何突然的变化都应该被怀疑，同时良好的试验规范和定期检测支原体污染也十分必要。支原体检测的方法有很多种，如直接培养、DNA荧光染色、ELISA和PCR法等。

GMyc-PCR支原体检测试剂盒主要采用PCR方法对各种生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等）支原体感染的检测。它综合了几个优势：灵敏、特异、快速并且可以用直接用细胞培养上清液检测。本制品通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体，所用引物为根据支原体16S-23S rRNA序列保守区域设计，只特异性扩增支原体DNA，检出灵敏度与特异性均较高。PCR扩增及电泳分析只需数个小时，操作方便简单。

1、灵敏度高：更低含量的支原体也能检测到，能够更早发现支原体污染

2、特异性强：和其他近亲缘菌样本同时检测，仅支原体被检出

3、适用范围广：可以用直接用细胞培养上清液检测

肺炎近缘生物菌 --无PCR扩增条带

检测限更低10copies/μL

性能优于竞品

太阳成集团40601ES和竞品同时检测，40601特异性及灵敏度更高

干冰运输，-25~-15℃保存，有效期18个月。若较长时间不用，请避光保存。

Q：检测准吗？巢式 pcr 什么意思？为什么要做两轮 pcr？

A：巢式 PCR 通过两轮扩增的方式，增加了产品的特异性和灵敏度，可以对 10 拷贝的支原体进行检测。

Q：GMyc-PCR 支原体检测试剂盒，能测细胞吗？细胞支原体测定方法是什么样的？

A：可以的，如果使用细胞悬液做样品，则需要提取DNA 后再进行 PCR。加入量一般为反应体系 1/10 的量或更少。

Q：对于同一个样品，为什么一步法恒温试剂盒检测结果为阳性，而 PCR 检测为阴性呢？

A：一步法恒温检测试剂盒检测的支原体的种类是 27 种，而 PCR 检测方法检测的是常见的 13 种支原体。样品中污染的支原体可能不包括在 PCR 法检测的支原体种类内。

Q：巢式 PCR 法和一步法恒温支原体检测试剂盒他们的优势在哪些方面，怎么选择？

A：PCR 法的灵敏度高于一步法检测，而一步法的灵敏度是 10^3 个拷贝才能检测出来。一步法检测的细胞支原体种类达 20 多种多于 PCR 法。

Q：GMyc-PCR 支原体检测结果如何判断？

A：GMyc-PCR 支原体检测方法通过巢式 PCR 的方式获得检测结果。整个实验由 2 轮PCR 组成，检测结果以第二轮为准。

Q：说明书中写的是不加loading buffer，直接点样就可以，我点样之后所哟有样品均没有条带（包含阳性对照），阳性对照加了loading buffeer才有条带。

A： 经确定客户配胶的时候未加入EB染料，他们的染料是加在loading buffer中的，所以不加入自己的loading buffer跑不出条带。

EB加入方式：

     1.如果配琼脂糖凝胶的时候加入EB染料，跑胶的的样品中不需要加入了;

     2.如果配琼脂糖凝胶的时候未加入EB染料，跑胶的的样品中需要加入EB染料。

Q：阳性对照是哪种支原体呢？

A：猪鼻子支原体。

Q: 第二轮扩增的模板用什么稀释?

A: 可以用双蒸水稀释。