CFDA, SE,英文全称Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester,是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞示踪染料,不仅可用于细胞增殖的体外实验,还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。
CFDA, SE是二乙酸荧光素(Fluorescein diacetate,FDA)的衍生物,具细胞膜渗透性,本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后,可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl ester,CFSE),可发强烈的绿色荧光,不能穿透细胞膜,能完好的保留在胞内。CFSE还可自发性并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上,同时过量且未被偶联的CFDA, SE通过被动扩散回到细胞外培养基内,被后续清洗步骤所清除。经CFDA, SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定,稳定标记的时间可达数月,因此非常适用于细胞群落分析。
CFDA, SE标记细胞的荧光非常均一,优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26,并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中,CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,荧光强度变为亲代细胞的一半,通过流式细胞仪(FL1通道)根据荧光强度的不同,可检测出未分裂细胞,分裂一次(1/2的荧光强度),二次(1/4的荧光强度),三次(1/8的荧光强度),以及更多分裂次数的细胞。CFSA,SE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFDA, SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究,且具有不会使邻近细胞染色的功能。CFDA, SE最常用于淋巴细胞的增殖检测,也可用于成纤维细胞,自然杀伤细胞,造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。
CFDA, SE标记细胞呈绿色荧光,Ex=494 nm,Em=521 nm,除了流式细胞仪检测细胞增殖外,还可用荧光酶标板定量活细胞数目,或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。本品以粉末形式提供,需用DMSO制备储存液后再使用。
中文名称(Chinese Synonym) | 5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯 |
英文名称(English Synonym) | 5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester |
CAS号(CAS NO.) | 150347-59-4 |
分子式(Molecular Fomular) | C29H19NO11 |
分子量(Molecular Weight) | 557.46 |
纯度(Purity) | ≥94%(HPLC) |
外观(Appearance) | 类白色固体 |
Ex/ Em | 494/521 nm |
结构式(Structure) | ![]() |
室温运输。-20℃干燥避光保存,有效期2年。避免反复冻融。
Q:使用范围?
A:可以直接染色活的细胞或组织,对于固定的细胞或组织通常用 4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高,或者染色效果差。
Q:可以检测细菌细胞的增殖情况吗?
A:理论上可以,细菌有一层细胞壁,要先去除细胞壁,再染色。
Q:检测仪器?
A:荧光显微镜、共聚焦显微镜、酶标仪、流式细胞仪。
Q:使用范围?
A:可以直接染色活的细胞或组织,对于固定的细胞或组织通常用 4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高,或者染色效果差。
Q:可以检测细菌细胞的增殖情况吗?
A:理论上可以,细菌有一层细胞壁,要先去除细胞壁,再染色。
Q:检测仪器?
A:荧光显微镜、共聚焦显微镜、酶标仪、流式细胞仪。
[1] Cai Z, Zhang Y, Zhang W, et al. Arsenic retention in erythrocytes and excessive erythrophagocytosis is related to low selenium status by impaired redox homeostasis. Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)
[2] Yang X, Zhao L, Zheng L, Xu M, Cai X. Polyglycerol grafting and RGD peptide conjugation on MnO nanoclusters for enhanced colloidal stability, selective cellular uptake and cytotoxicity. Colloids Surf B Biointerfaces. 2018;163:167-174. doi:10.1016/j.colsurfb.2017.12.034(IF:3.887)