肠道是人体重要的消化器官，肠指的是从胃幽门至肛门的消化管，是消化器官中最长管道，人体肠道结构主要包括小肠和大肠。肠道疾病非常常见，如肠梗阻、慢性炎症性肠病、结直肠癌等，其中结直肠癌已成为威胁人类健康最严重的疾病之一。因此，肠道的研究是现在非常热门的领域，有着广阔的应用前景。

01

人肠类器官培养步骤

人肠类器官的培养

重悬隐窝基质胶混合物，孔板中加入一定量的混合物和隐窝培养基（如24孔板（84013ES）可加入50 μL混合物和500 μL培养基）。
用离心管转移到超净工作台里，PBS（含双抗60162ES）润洗2-3次，将肠粘膜转移至含有EDTA（2 mM）（60163ES）的溶液中，置于4℃，小肠消化约30 min，结肠消化约1h。
将消化好的小肠粘膜转移至离心管中，加入PBS（60158ES），摇晃均匀后用70 μm的细胞过滤筛（84702ES）过滤，1000 rpm室温离心5 min，结肠隐窝无需过滤。
弃上清，加入培养基重悬沉淀，计数，隐窝的数量约10个/μL为佳。
加入一定量的悬液到离心管中，室温离心5 min。
加入预冷的基质胶混合物（基质胶：培养基为2:1）重悬沉淀。
将重悬液按一定量接种在预热的孔板中。
每个孔加入一定量的预热的隐窝培养基，37℃培养1-2周。

人肠类器官的传代

可按1：1 - 3：1进行传代培养。
在培养板中，每孔加入一定量的培养基，用枪头将基质胶小心的刮出，取悬液，转移到离心管中。
将要传代的隐窝置于冰上5-10 min。
用枪头吹打基质胶，反复进行，直至基质胶被打碎，中间尽量避免气泡产生。
将消化好的小肠粘膜转移至离心管中，加入PBS，摇晃均匀后用70 μm的细胞过滤筛过滤，1000 rpm室温离心5 min，结肠隐窝无需过滤。
弃上清，加入培养基重悬沉淀，计数，隐窝的数量约10个/μL为佳。
加入一定量的悬液到离心管中，室温离心5 min。
加入预冷的基质胶混合物（基质胶：培养基为2：1）重悬沉淀。

人肠类器官的冻存

将需要冻存的类器官置于冰上5-10 min。
收集类器官，离心后弃上清。
加入冻存培养液重悬类器官，分装至冻存管（84105ES）中，置于-80℃，24h后置于液氮中长期保存。

02

人肠类器官培养结果

用光学显微镜观察人肠类器官培养情况：

数据来源：Yeasen实验室

结果显示：人肠类器官具有光滑、完整的圆形或近圆形轮廓，边缘清晰，暗色的环状边缘包围着一个明亮的中心腔。

03

细胞因子产品推荐

HiActi^®细胞因子

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HiActi®细胞因子
名称	货号	推荐浓度
Recombinant Human EGF Protein 重组人表皮生长因子	92708ES	50 ng/mL
Recombinant Human Noggin Protein 重组人Noggin蛋白（液体）	92623ES	100 ng/mL
Recombinant Human IL-22 重组人白介素-22	90121ES	2 ng/mL
Recombinant Human Wnt-3a protein 重组人Wnt3a蛋白（液体）	92294ES	100 ng/mL
Recombinant Human RSPO1/R-spondin-1 Protein 重组人RSPO1蛋白	92278ES	500 ng/mL

其他产品

类别	产品名称	货号
抗体	Chromogranin A Rabbit mAb	38186ES
抗体	Lysozyme Rabbit pAb	760711ES
基质胶	Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free基质胶	40192ES
小分子化合物	L-Alanyl-L-Glutamine	60701ES
	A83-01	53002ES
	Nicotinamide	51402ES
	Primocin	60281ES
	SB-202190	53005ES
	CHIR99021	53003ES
	Y-27632 dihydrochloride	52604ES
	NAC	50303ES
	BP-1-102	53174ES
	LY294002	52403ES
	MK-2206 2HCl	53008ES
	Rapamycin	52404ES
	Prostaglandin (PG) E2	60810ES

参考文献：

1. He G-W, Lin L, DeMartino J, Zheng X, Staliarova N, Dayton T, et al. Optimized human intestinal organoid model reveals interleukin-22-dependency of paneth cell formation. Cell Stem Cell 2022; 29(9):1333-1345.e1336.

04

细胞因子选购指南

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GMP级细胞因子类器官培养干细胞培养免疫细胞培养细胞固定基质问题解答

类别

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GMP级重组人bFGF/FGF2—干细胞培养的核心因子

GMP级重组人白介素-1β（IL-1 beta）正式出道

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类别

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WNER—类器官培养中最经典的细胞因子培养方案

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