PCR替代方案！超全等温扩增RPA产品选择指南，助力现场快速检测！
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2026-02-03
重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是Piepenburg等人在2006年利用重组酶、单链DNA结合蛋白和链置换DNA聚合酶等开发出的一种新的核酸恒温扩增技术。该技术能够在10~30 min内进行恒温（37~42℃）下的单分子核酸检测，它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测，可广泛应用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域，有望成为聚合酶链式反应 (PCR) 替代方案。
RPA技术简介
RPA技术的原理是重组酶蛋白与引物（A）形成复合物，能在双链DNA中寻找同源序列（B）。然后通过重组酶（C）的链置换活性将引物插入同源位点，并且单链结合蛋白稳定置换DNA链（D）。随后重组酶被分解，使得引物的3'末端被链置换并与DNA聚合酶结合（E），使其延长引物（F），通过循环重复该过程对模板上的目标区域进行指数式扩增。
图1. RPA等温扩增技术原理图
RPA技术检测方法
基础型RPA检测方案，仅需在反应体系中加入一对特异性引物进行扩增，然后对扩增产物进行纯化，再进行琼脂糖凝胶电泳即可实现对检测结果的判读。
向基础型RPA反应体系中加入核酸外切酶Ⅲ(exonucleaseⅢ，exo)和exo荧光探针，或加入甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(formamide pyrimidine DNA glycosylase，fpg)和fpg荧光探针，用荧光定量仪来实时检测RPA反应。
1） exo探针法：在RPA的基础上，加入了核酸外切酶III（exonuclease III，即exo）和exo荧光探针，核酸外切酶III会特异地切割荧光探针（THF位点），荧光基团与淬灭基团分开，发出荧光信号，通过荧光收集的仪器来实时监控荧光值的变化。
图2. exo探针法检测原理图
2）fpg探针法：在RPA的基础上，加入甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶（fpg）及fpg荧光探针，当探针与模板结合时，fpg酶识别dR连接臂（dR group）并切割该位点，使得荧光基团与淬灭基团分开，发出荧光信号，通过荧光收集的仪器来实时监控荧光值的变化。
图3. fpg探针法检测原理图
在RPA的基础上，加入核酸外切酶Ⅳ（endonuclease Ⅳ，即nfo）、nfo探针和生物素标记的反向引物。当nfo探针与模板链互补时，核酸外切酶Ⅳ识别并切割THF残基位点，扩增获得既有探针标记物又有引物标记物的扩增子。然后加入对应的标记抗体，就能看到试纸条检测线上的结果条带。
图4. NFO探针法检测原理图
太阳成集团RPA体系核心原料
太阳成集团Zyme Editor™ 酶改造平台针对RPA技术，目前已获得RPA全系列性能优良的产品，包括链置换Bsu DNA polymerase、T4 UvsX Recombinase、T4 UvsY protein、T4 gene 32 protein、Exonuclease III等，搭配通用的扩增反应液，可满足不同用户对于各种检测体系的探索。同时，tyc234cc 太阳成集团核心应用研发团队，经过缓冲液中各种离子配比的调试、酶的组合优化、多种辅因子添加等开发了适用于荧光型、层析型、电泳型三种方法进行核酸检测的常规液体型RPA预混液以及冻干粉形式，使用时只需加入特异性引物/探针、模板，30min左右即可完成检测，满足各种应用场景的快速检测需求。
电泳型RPA预混液部分数据展示
不同GC含量和片段长度扩增
图5. (A) 16727扩增不同GC含量靶标；（B）16727扩增不同长度靶标
使用16727ES依次扩增GC含量为40%-70%的靶标及长度100bp-500bp的靶标，阳性均能够出现明显、唯一的电泳条带，阴性均无明显条带，表明该产品对于不同GC含量及不同长度的靶标均能完成扩增。
稳定性测试
图6. (A) 16728正常保存稳定性测试；（B）16728冻融10次稳定性测试；（C）16728在37℃放置5天稳定性测试
考察16728的反复冻融和热加速稳定性，使用干冰将16728试剂反复冻融10次或者将16728在37℃条件下放置5天后，与正常保存的16728试剂，同时检测两个浓度靶标（P1-10 copies/μL,P2-2 copies/μL)，不同条件处理的16728试剂，两个浓度电泳条带明显、唯一，表明16728试剂稳定性良好。
灵敏度
图7. 16727和友商产品灵敏度比较
使用16727和市面上同类产品，同时检测竞品试剂盒中梯度稀释的阳性对照模板，检测结果显示，16727检测灵敏度更有优势。
太阳成集团RPA产品选择指南
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产品大类 |
产品名称 |
产品货号 |
产品类型/作用 |
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RPA Kit （液体型） |
DNA Rapid Isothermal Amplification Kit（Fluorescent） |
16702ES |
荧光型RPA Kit（Exo探针法） |
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RNA Rapid Isothermal Amplification Kit（Fluorescent） |
16708ES |
荧光型RT-RPA Kit（Exo探针法） |
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DNA Rapid Isothermal Amplification Kit（Chromatographi） |
16725ES |
层析型RPA Kit（Nfo探针法） |
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RNA Rapid Isothermal Amplification Kit（Chromatographi） |
16726ES |
层析型RT-RPA Kit（Nfo探针法） |
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DNA Rapid Isothermal Amplification Kit (Basic) |
16727ES |
电泳型RPA Kit |
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RNA Rapid Isothermal Amplification Kit (Basic) |
16728ES |
电泳型RT-RPA Kit |
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RPA Kit （冻干粉） |
DNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit（Fluorescent） |
16904ES |
荧光型RPA （Exo探针法）（原位冻干粉） |
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RNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit（Fluorescent） |
16905ES |
荧光型RT-RPA（Exo探针法）（原位冻干粉） |
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DNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit（Chromatographi） |
16906ES |
层析型RPA （Nfo探针法）（原位冻干粉） |
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RNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit（Chromatographi） |
16907ES |
层析型RT-RPA（Nfo探针法）（原位冻干粉） |
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DNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit (Basic) |
16908ES |
电泳型RPA （原位冻干粉） |
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RNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit (Basic) |
16909ES |
电泳型RT-RPA （原位冻干粉） |
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单组份 |
11078ES |
结合引物与原始靶核酸序列互补合成新的DNA模板 |
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11079ES |
具有配对和链转移活性的重组酶 |
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11080ES |
重组酶辅助因子，刺激T4 UvsX的单链DNA依赖性ATP酶活性并降低活性所需的T4 UvsX临界浓度 |
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11081ES |
参与DNA复制、修复、重组与解链后的单链DNA结合，防止自杂交 |
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14502ES |
刺激ATP和肌酸分解为磷酸肌酸和ADP，释放能量 |
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14525ES |
具有3’→5’外切酶活性，切断荧光探针中淬灭基团，释放荧光 |
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2× RPA Amplification Buffer |
16928ES |
RPA通用buffer |
