离心柱法 | 中草药薄荷RNA提取
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2026-04-22
实验所用试剂设备清单
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货号 |
产品名称 |
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MolPure® Plant Plus RNA Kit 多糖多酚植物 RNA提取试剂盒 |
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— |
β-巯基乙醇 |
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无水乙醇 |
实验前准备
1．自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，RNase-free离心管，β-巯基乙醇、无水乙醇等。
2．除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，切勿冰浴或低温离心。使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。
3．首次使用前，在1 mL裂解液LB*中加入20 μL β-巯基乙醇。建议现配现用。加入β-巯基乙醇后的裂解液LB*分装4℃保存，数周内稳定。
4．首次使用前，在结合液BD*瓶中加入指定体积的无水乙醇（以50 T规格为例，24 mL结合液BD*需加入30 mL无水乙醇），充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持结合液BD*中的乙醇含量。
5．首次使用前，在漂洗液W*瓶中加入指定体积的无水乙醇（以50 T规格为例，24 mL漂洗液W*需加入60 mL无水乙醇），充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液W*中的乙醇含量。
操作步骤
1．按照样本数量，将裂解液LB 500 μL和β-巯基乙醇（自备）10 μL混合配制成一份作用缓冲液，共8份。将配制后的作用缓冲液分装至1.5 mL RNase-free离心管中，待用。
2．取剪碎处理的新鲜薄荷组织（采摘1天）用液氮研磨至细粉状。
3．迅速转移50 mg细粉至装有作用缓冲液的RNase-free离心管中，立即涡旋振荡1 min，室温放置5 min。
4．加入100 μL缓冲液HB，轻柔混匀。
5．12,000 rpm离心5 min，小心吸取上清至新的1.5 mL RNase-free离心管中。
6．将DNA去除柱套入2 mL收集管中，备用。
7．加入上述裂解混合物至DNA去除柱中，12,000 rpm离心5 min，保留滤过液。
8．小心将滤过液中的上清液450 μL转移至新的2 mL RNase-free离心管（自备）中，加入675 μL结合液BD*，轻柔混匀。
9．将上述混合液全部加入RNA吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，弃掉滤过液。
10．加入500 μL去蛋白液PL，12,000 rpm离心1 min，弃废液。
11．加入700 μL无水乙醇，12,000 rpm离心1 min，弃废液。
12．将RNA吸附柱放回收集管，加入700 µL漂洗液W*，12,000 rpm离心1 min，弃废液。重复一遍步骤12。
13．将RNA吸附柱放回收集管，空柱12,000 rpm离心2 min，以除去残留的漂洗液W*。
14．将RNA吸附柱放入新的1.5 mL RNase-free离心管中，在吸附柱中央加入50 µL RNase-free H2O，室温放置2 min。然后12,000 rpm 离心1 min。收集滤液，即为RNA溶液。
质检结果—RNA浓度和纯度
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样本序号 |
浓度（nanodrop）ng/μL |
A260/A280 |
A260/A230 |
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1 |
231.853 |
2.16 |
2.1 |
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2 |
431.254 |
2.18 |
2.01 |
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3 |
897.468 |
2.17 |
2.44 |
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4 |
388.345 |
2.17 |
2.28 |
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5 |
201.038 |
2.16 |
2.31 |
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6 |
291.764 |
2.17 |
2.29 |
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7 |
414.972 |
2.17 |
2.36 |
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8 |
188.763 |
2.16 |
2.3 |
质检结果—RNA完整度分析
实验结论
采用tyc234cc 太阳成集团离心柱法多糖多酚植物RNA提取试剂盒（19292ES）提取8个薄荷样本，通过Nanodrop检测RNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整度，结果显示：提取的薄荷RNA浓度较好，纯度好，能够满足后续分子实验要求。（28S条带有一点降解，可能与薄荷采摘放置一天有关）
