上新 | 载体自连，背景太高？试试75℃/5 min彻底失活的热敏磷酸酶（Anp）
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2026-06-01
在分子生物学实验中，去磷酸化是核酸修饰、克隆构建、测序分析等实验的关键步骤，其效率与准确性直接关系到实验结果的可靠性。如果去磷酸化不完全，会引发一系列关键问题：在分子克隆中，线性化载体可能发生自连，显著降低克隆效率；在测序与SNP分析中，残留的dNTPs会干扰结果判读，影响分析的准确性。
图1. 去磷酸化过程影响载体自连示意图
为精准破解上述行业痛点，tyc234cc 太阳成集团推出高性能 Antarctic Phosphatase（简称 AnP, Cat#14511ES）—— 一款特性卓越的热敏型碱性磷酸酶，凭借其独特优势为科研工作者提供高效、便捷的去磷酸化解决方案。
该酶来源于大肠杆菌重组表达的南极细菌不耐热碱性磷酸酶，可非特异性催化 DNA、RNA 的 5′和 3′末端磷酸单酯去磷酸化，同时可高效水解核糖核苷酸及脱氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP），此外还能特异性作用于蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化，实现多场景实验覆盖。
图2. AnP催化DNA末端磷酸基团水解的工作原理示意图
相比其他碱性磷酸酶，其最显著的优势在于热敏特性，75℃加热 5 min即可完全不可逆失活，无需在连接或末端标记前进行复杂的酶去除操作，从根本上简化实验流程，解决传统酶处理后纯化步骤繁琐的痛点。
基于优异的酶学特性，太阳成集团AnP广泛适用于以下场景：
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核酸末端修饰：DNA 和 RNA 的 5 ' 和 3 ' 末端去磷酸化，为后续连接、标记等操作奠定基础；
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克隆载体构建：去除载体或DNA片段5'末端的磷酸基团，防止自连，提升连接效率与阳性克隆率；
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核酸末端标记前处理：在T4多聚核苷酸激酶（T4 PNK）介导的末端标记实验前，去除DNA末端磷酸基团，避免内源性磷酸基团干扰标记效果；
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测序与SNP分析样本制备：高效降解PCR反应中未掺入的dNTPs，消除干扰，保障结果准确；
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蛋白质修饰研究：实现特定氨基酸残基的去磷酸化，为蛋白功能与信号通路研究提供关键工具。
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快速去磷酸化：37℃孵育15 min即可完成反应；
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快速失活：75℃处理5 min即可完全不可逆失活
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使用便捷：在多种内切酶和PCR缓冲液中保持活性，可与质粒DNA酶切同步进行；
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兼容性强：适用于5’或3’突出末端、平端等各类DNA末端，操作步骤统一，便于后续连接反应。
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快速失活: 75℃处理5 min即可使酶完全失活
将AnP在75℃处理5 min（黄色）后，以pNPP为底物进行酶活测定，结果显示75℃处理5 min即可实现完全失活。
图3. 太阳成集团AnP灭活条件验证
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性能验证：Anp对酶切后载体进行脱磷处理可以大大降低载体酶切后的自连率
单酶切转化验证：将pUC19质粒经HindIII单酶切后，用AnP在37℃下处理15min，再于75℃灭活5 min。经T4 DNA连接酶连接并转化至DH5α感受态细胞后，载体自连率显著降低，背景转化子明显减少。
图4. 太阳成集团AnP对单酶切后载体脱磷降低自连率验证
双酶切转化验证：pUC19质粒经HindIII/NdeI双酶切过夜后，使用太阳成集团Anp在37℃条件下脱磷处理15 min，随后75℃灭活5 min。加入经HindIII/NdeI双酶切后332 bp的PCR产物片段，用T4 DNA连接酶进行连接并转化DH5α。从该平板挑取7个单克隆，利用pUC19特异性引物进行菌落PCR验证。结果显示载体自连率显著降低，背景转化子明显减少。
图5. 太阳成集团AnP对双酶切后载体脱磷降低自连率验证
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切口酶、核酸外切酶、DNase和RNase残留低
经琼脂糖凝胶电泳检测，三批次AnP与核酸底物共同孵育后，电泳条带清晰、单一，未见降解或拖尾现象。结果表明，该产品纯度极高，切口酶、核酸外切酶、DNase和RNase残留极低，可有效保障实验结果的准确性与可靠性。
图6. 太阳成集团AnP切口酶、核酸外切酶、DNase和RNase残留检测结果
为满足不同实验场景的需求，tyc234cc 太阳成集团还提供系列碱性磷酸酶产品：
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产品名称 |
产品货号 |
特性 |
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Antarctic Phosphatase (AnP)热敏磷酸酶 |
在75℃ 加热 5 min的条件下不可逆失活 |
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Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) 虾碱性磷酸酶 |
在65℃ 加热 5 min的条件下不可逆失活 |
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Alkaline Phosphatase, Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶 |
在螯合剂存在下，65℃加热30 min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活 |
