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1. 产品概述

Anti-Flag亲和纯化凝胶（Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel），主要用于带有Flag标签的融合蛋白免疫沉淀（IP）和纯化，其核心组分是抗体与凝胶组成的吸附剂。本产品选用高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体，通过供价偶联的方式与Sepharose 4B gel形成紧密联系的吸附剂，能够特异性吸附Flag蛋白序列，得到高纯度的Flag标签蛋白。

« 目的蛋白载量高：载量≥1.1mg蛋白/mL凝胶

« 结合蛋白类型多：Met-FLAG–Protein，N端FLAG–Protein，C端FLAG-Protein

« 填料质量硬：包被高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体，浓度>7.5g抗体/L凝胶

« 性价比更高：进口一半的价格，一年节省50%科研经费

2. 产品原理

Anti-Flag亲和纯化凝胶的核心原理为亲和纯化技术：利用生物分子之间的特异性结合的作用进行生物物质的分离纯化，将鼠源IgG2b单克隆抗体与Sepharose 4B gel通过供价偶联制备形成特异性吸附Flag蛋白序列的亲和吸附剂，将带有Flag标签的目的蛋白吸附到吸附剂上，然后选择合适的洗脱液将目的蛋白从吸附剂上解吸。具体流程图如下：

图1 Anti-Flag亲和纯化凝胶实验流程图

3. 产品优势

1）超高纯化效率

本产品具有超高的纯化效率，≥1.1mg蛋白/mL凝胶的载量，可满足所有实验要求。

图2 Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶质检数据

Line 1：太阳成集团Flag-gel与E. coli裂解液混合纯化后电泳；Line 2：阴性对照

2）PK进口品牌S*M2 Flag-gel

高品质，高质量，与进口产品相比，同样不惧

图3 PK进口品牌S*M2 Flag-gel

Line 1,2: 太阳成集团Flag-gel, 3×Flag peptide洗脱; Line 3,4: 太阳成集团Flag-gel, Gly-HCl洗脱; Line 5,6: S*M2 Flag-gel, 3×Flag peptide洗脱; Line 7,8: S*M2 Flag-gel, Gly-HCl洗脱

3）更高性价比

Yeasen致力于为您提供性价比高的产品，Anti-flag亲和纯化凝胶可为您节约50%科研经费。

图4 Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶产品与S品牌同级别产品价格比较

4. 常见问题

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	清洗树脂。
	填料被堵塞	裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤，或离心去除。
	样品太黏稠	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5µg/ml），Mg2+(终浓度1mM)，冰上孵育10-15min
	缓冲液太黏稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白	Flag标签蛋白变性了	使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
	过度的裂解使目的蛋白变性	使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
	Flag多肽失效	更换Flag多肽
	目的蛋白聚集产生沉淀	在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10mM
	融合蛋白改变了Flag的构象，影响了目的蛋白的结合力	测定pGEX中Flag的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中Flag有很高的亲和力，有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了Flag标签蛋白的亲和力。
	融合蛋白改变了Flag的构象，影响了目的蛋白的结合力	降低结合温度至4℃，充分清洗。
目的蛋白没有完全洗脱下来	洗脱体积太少	增加洗脱液体积，减小洗脱流速。
	洗脱液中Gly-HCl的pH 发生改变	使用新鲜配制的洗脱液
	洗脱液孵育时间不够	增加洗脱液与凝胶的孵育时间
电泳或western blot检测中发现多条带	Flag融合蛋白已经发生降解	在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF
	Flag融合蛋白已经发生降解	可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT）
	细胞破碎过度	减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1倍10mg/ml溶菌酶，25mM Tris-HCl，pH8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与Flag融合目的蛋白的共纯化。
	抗体与E. coli的各种蛋白反应	抗体吸附E. coli蛋白：Flag-抗体；超声处理去除Flag抗体，可以用Western Blot检测

5. 订购信息

产品名称	产品编号	规格
Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶）	20585ES01	100 μL
	20585ES03	1 mL
	20585ES08	5 mL
	20585ES25	25 mL
	20585ES60	100 mL

6. 相关产品推荐

His标签蛋白纯化

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HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF （His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂）	＞40mg 6×His-tagged protein	0.3MPa, 3bar	20503ES10/50/60/80	10/50/ 100/1000
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产品名称	载量（/mL填料）	最大压力	产品编号	规格（mL）
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF （MBP标签蛋白高度交联纯化树脂）	＞10mg MBP蛋白（80kDa）	0.3 MPa,3bar	20515ES08/25	5/25
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产品名称	蛋白结合量（/mL填料）	产品编号	规格
Anti-HA Affinity Gel（Anti-HA亲和纯化凝胶）	≥0.6mg蛋白	20586ES03/08/25/60	1/5/25/100mL
Anti-Myc Affinity Gel（Anti-Myc标签亲和纯化凝胶）	≥0.6mg蛋白	20587ES03/08/25/60	1/5/25/100mL
Anti-V5 Affinity Gel（Anti-V5标签亲和纯化凝胶）	≥1.1mg蛋白	20588 ES03/08/25/60	1/5/25/100mL

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