汉逊酵母细胞应用及其残留DNA质控

汉逊酵母是一种单细胞真核微生物，一种用于重组乙型肝炎疫苗生产的表达系统。汉逊酵母优势不仅在于易培养、繁殖快、便于遗传操作、能对外源产物进行翻译后加工和修饰，代谢产物无毒性等，还具耐高温，能直接糖化和发酵木糖生产乙醇等特性。正是这些优势特征使得汉逊酵母迅速发展成为生物药领域中热门的细胞工厂之一，其潜力巨大，将为今后基因工程产品的开发和拓展提供重要的研究平台。

汉逊细胞作为宿主工程细胞，重组汉逊酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg）经纯化，加佐剂（氢氧化铝、氯化钠、硫柳汞）吸附后可制成重组乙型肝炎疫苗；且重组汉逊酵母细胞还可表达HPV31L1蛋白且所产生的HPV31L1蛋白可用于制备预防性HPV疫苗。尽管在汉逊酵母制备重组乙型肝炎疫苗和预防性HPV疫苗的生产过程中已有残留DNA的去除工艺，但疫苗产品中仍有可能残留宿主DNA及其片段。所以汉逊酵母检测项目是生物制品生产工艺中重要的质量检测指标之一。

残留DNA风险及法规监管要求

国内外监管机构对于疫苗中的DNA残留量和残留片段的大小分布等有强烈的关注。针对不同宿主细胞、给药方式和频率，一般允许的宿主残留DNA含量在100 pg~10 ng/剂之间。对于残留DNA的最大可承受量为10 ng/剂，对于DNA大小片段的要求则为小于一个功能基因的长度。国家药监局药审中心在今年5月发布的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》中明确建议汉逊酵母残留片段大小控制在200bp以内。

残留DNA检测方法

《中华人民共和国药典》2020年版第三部规定，外源性DNA残留检测采用DNA探针杂交法、荧光染料法和定量PCR法。目前市场上对宿主细胞残留DNA检测，主要采用荧光探针qPCR方法，qPCR法具有极高的灵敏度、序列特异性和准确性，可为生物制药工业在工艺研究和成品质量控制方面提供可靠的检测手段，现也已成为各生物制品厂家首选检测方法。

为控制疫苗生产质量，需要对疫苗生产全过程进行安全性质量控制。针对重组乙型肝炎疫苗和预防性HPV疫苗生产过程中的半成品、原液和成品等样本，tyc234cc 太阳成集团从市场需求出发，自主研发了汉逊酵母宿主细胞DNA残留检测试剂盒，主要用于人重组乙型肝炎疫苗和人乳头状瘤病毒(HPV)疫苗研发和生产工艺过程中样本残留宿主细胞DNA杂质检测。其能专一快速的检测抗体药、重组蛋白疫苗等生物制品研发和生产过程的中间品、半成品和成品中 DNA 残留量。还研发了与汉逊酵母残留DNA检测试剂盒配套使用的宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒，以及配套的自动化核酸提取仪器。

汉逊酵母残留DNA检测Kit产品性能

灵敏度高：检测下限可低至3 fg/μL；
准确性高：DNA参考品与国家标准物质标曲基本无偏差，检测值CV＜5%；
精密度高：重复性CV值＜10%，好于行业标准（15%），中间精密度＜15%；
专属性强：不同细胞系间无交叉反应；
定量准确：配套专属磁珠法样本前处理试剂盒；
操作时间短：3小时内完成全部检测流程；
稳定性好：多次反复冻融扩增效率仍较高，-20℃可储存2年。

产品信息

产品	名称	货号	规格
样本前处理试剂盒	MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（瓶装）	18461ES	25T/100T
样本前处理试剂盒	MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒FA（预封装）	18462ES	2×16 T/6×16 T
核酸提取仪器	Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system Auto-Pure 32A全自动核酸提取仪	80501ES01	32通量
残留DNA检测试剂盒	Hansenula polymorpha Host Cell DNA Residue Detection Kit 汉逊酵母宿主细胞DNA残留检测试剂盒	41317ES	50T/100T

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Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒（2G）	41307ES
MDCK宿主细胞DNA残留检测试剂盒	41319ES
HEK293宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒	41316ES
Human宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒	41326ES
Vero宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒	41314ES
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