嘌呤霉素(Puromycin)是一种由白黑链霉菌产生的氨基苷类抗生素，是氨酰-tRNA分子3´末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中，打乱核糖体上的肽转运，造成翻译过程中不成熟链终止，从而抑制蛋白质合成。

图1嘌呤霉素结构式(CAS NO. 53-79-2)

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(pac)，赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。嘌呤霉素作用迅速，在低浓度下即可快速导致细胞死亡。贴壁哺乳细胞对浓度为2-5 µg/ml的嘌呤霉素较为敏感，而悬浮细胞对浓度低至0.5-2 µg/mL的嘌呤霉素已经很敏感。对嘌呤霉素稳定耐药的哺乳细胞可在一周内生成。

稳转细胞株筛选

实验原理：

通过将外源DNA/shRNA克隆到带有pac基因的载体上，重组载体转染至宿主细胞并整合到其染色体中，并随细胞分裂稳定传递，最后用嘌呤霉素进行筛选。

准备及预实验：

1. 建议使用浓度

哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要预实验来确定。

大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125 μg/mL。使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节。

2. 溶解方法

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液，0.22 μm滤膜过滤除菌后分装，于-20℃冻存。

3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关，确定杀死未转染细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。初次做实验一定要先进行Puromycin梯度筛选预实验，建立杀死曲线（kill curve）。

1）以5~8×104 cells/孔的密度24孔板铺板，培养过夜。

2）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15 μg/mL，至少5个梯度）。

3）更换新鲜配制的筛选培养基，继续培养，并观察细胞生长情况，每2-3天更换新鲜筛选培养基。

4）每日观察细胞存活情况，4-6天内有效杀死所有非转染细胞的药物为最低浓度。

稳转株的筛选

慢病毒感染48-72h后（70-80%融合度），将细胞培养于含适当浓度Puromycin的培养液中，筛选至少48h。当对照未转染的细胞加puro组全部死亡时，感染病毒组剩下全部是阳性细胞。

【注】：①当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。细胞密度最好不超过25%。②每日观察细胞生长状态，嘌呤霉素的筛选至少需要48 h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。③病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素筛选时，越高MOI，含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度，调整嘌呤霉素的浓度去筛选转染细胞，但是嘌呤霉素的浓度不能低于杀死曲线的最低有效浓度；

2）加入含有最低浓度的Puromycin培养基扩增细胞，待qPCR检测结果合格后进行冻存。

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产品名称	产品编号	规格	外观
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	60210ES60	100 mg
	60210ES72	250 mg
	60210ES76	500 mg
	60210ES80	1 g
Puromycin (Solution 10 mg/mL) 嘌呤霉素盐酸盐溶液CAS:58-58-2	60209ES10	1×1 mL	液体（10 mg/mL in H₂O）
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	60209ES76	50×1 mL

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[1] Zhang D, Liu Y, Zhu Y, et al. A non-canonical cGAS -STING-PERK pathway facilitates the translational program critical for senescence and organ fibrosis. Nat Cell Biol . 2022;24(5):766- 782. doi:10.1038/s41556-022-00894-z (IF:28.824)

[2] Lu T, Zhang Z, Zhang J, et al. CD73 in small extracellular vesicles derived from HNSCC defines tumor-associated immunosuppression mediated by macrophages in the microenvironment. J Extracell Vesicles . 2022;11(5):e12218. doi:10.1002/jev2.12218 (IF:25.841)

[3] Meng F, Yu Z, Zhang D, et al. Induced phase separation of mutant NF2 imprisons the cGAS-STING machinery to abrogate antitumor immunity. Mol Cell . 2021;81(20):4147-4164.e7.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.040 (IF:17.970)

[ 4] Chen S, Liu S, Wang J, et al. TBK1-Mediated DRP1 Targeting Confers Nucleic Acid Sensing to Reprogram Mitochondrial Dynamics and Physiology. Mol Cell . 2020;80(5):810-827.e7.doi:10.1016 /j.molcel.2020.10.018 (IF:15.584)

[5] Zhao Q, Zheng K, Ma C, et al. PTPS Facilitates Compartmentalized LTBP1 S-Nitrosylation and Promotes Tumor Growth under Hypoxia. Mol Cell . 2020;77(1 ):95-107.e5. doi:10.1016/j.molcel.2019.09.018 (IF:14.548)

[6] Mo J, Liu F, Sun X, et al. Inhibition of the FACT Complex Targets Aberrant Hedgehog Signaling and Overcomes Resistance to Smoothened Antagonists. Cancer Res . 2021;81(11):3105-3120. doi:10.1158/0008-5472.CAN-20-3186 (IF:12.701)

[7] Zou Y, Wang A, Shi M, et al al. Analysis of redox landscapes and dynamics in living cells and in vivo using genetically encoded fluorescent sensors. Nat Protoc . 2018;13(10):2362-2386. doi:10.1038/s41596-018-0042-5 (IF:12.423)

[8] Mao L, Chen J, Lu X, et al. Proteomic analysis of lung cancer cells reveals a critical role o f BCAT1 in cancer cell metastasis. Theranostics. 2021;11(19):9705-9720. Published 2021 Sep 27. doi:10.7150/thno.61731 (IF:11.556)

[9] Han L, Zhang F, Liu Y, et al al. Uterus globulin associated protein 1 (UGRP1) binds podoplanin (PDPN) to promote a novel inflammation pathway during Streptococcus pneumoniae infection. Clin Transl Med. 2022;12(6):e850. doi:10.1002/ctm2.850 (IF:11.492 )

[10] Zhang M, Liu F, Zhou P, et al. The MTOR signaling pathway regulates macrophage differentiation from mouse myeloid progenitors by inhibiting autophagy. Autophagy . 2019;15(7):1150-1162. doi:10.1080/15548627.2019. 1578040 (IF:11.059)

[11] Zhang S, Yang Z, Bao W, et al. SNX10 (sorting nexin 10) inhibits colorectal cancer initiation and progression by controlling autophagic degradation of SRC. Autophagy . 2020;16(4):735 -749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122 (IF:11.059)

[12] Zhang Y, Ding H, Wang X, et al. MK2 promotes Tfcp2l1 degradation via β-TrCP ubiquitin ligase to regulate mouse embryonic stem cel l self-renewal. Cell Rep . 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (IF:9.423)

[13] Jiang Y, Dong Y, Luo Y, et al. AMPK-mediated Phosphorylation on 53BP1 promotes c-NHEJ. Cell Rep . 2021;34(7):108713. doi:10.1016/j.celrep.2021.108713 (IF:9.423)

[14] Sun Q, Ye Y, Gui A, et al. MORTALIN-Ca ²⁺axis drives innate rituximab resistance in diffuse large B-cell lymphoma. Cancer Lett . 2022;537:215678. doi:10.1016/j.canlet.2022.215678 (IF:8.679)

[15] Jin R, Zhao A , Han S, et al. The interaction of S100A16 and GRP78 actives endoplasmic reticulum stress-mediated through the IRE1α/XBP1 pathway in renal tubulointerstitial fibrosis. Cell Death Dis . 2021;12(10):942. Published 2021 Oct 13. doi: 10.1038/s41419-021-04249-8 (IF:8.469)

[16] Zhang P, Zhang Z, Fu Y, et al. K63-linked ubiquitination of DYRK1A alleviates by TRAF2 Sprouty 2-mediated degradation of EGFR. Cell Death Dis . 2021;12(6):608. Published 2021 Jun 11. doi:10.1038/s41419-021-03887-2 (IF:8.469)

[17] Zhao T, Li Y, Shen K, Wang Q, Zhang J. Knockdown of OLR1 weakens glycolytic metabolism to repress colon cancer cell proliferation and chemoresistance by downregulating SULT2B1 via c-MYC. Cell Death Dis. 2021;13(1):4. Published 2021 Dec 17. doi: 10.1038/s41419-021-04174-w (IF:8.469)

[18] Zhou R, Wu Q, Wang M, et al. The protein phosphatase PPM1A dephosphorylates and activates YAP to govern mammalian intestinal and liver regeneration. PLoS Biol . 2021; 19(2):e3001122. Published 2021 Feb 25. doi:10.1371/journal.pbio.3001122 (IF:8.029)

[19] Wu S, Wang S, Lin X, Yang S, Ba X, Xiong D, Xiao L, Li R. Lanatoside C inhibits herpes simplex virus 1 replication by regulating NRF2 distribution within cells. Phytomedicine. 2024 Feb;124:155308. doi: 10.1016/j.phymed.2023.155308. (IF:7.9)

[20] Shen K, Song W, Wang H, Wang L, Yang Y, Hu Q, Ren M, Gao Z, Wang Q, Zheng S, Zhu M, Yang Y, Zhang Y, Wei C, Gu J. Decoding the metastatic potential and optimal postoperative adjuvant therapy of melanoma based on metastasis score. Cell Death Discov. 2023 Oct 25;9(1):397. doi: 10.1038/s41420-023-01678-6. (IF:7.0)

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