本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶，以含有T7启动子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板，因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。

注：G*为RNA转录的第一个碱基

本产品按照GMP规定生产，以液体形式提供，酶活浓度为250 U/μL。

极高的产量：1ug DNA 模板可产生100-200 µg

通用：适用于20nt-10000nt RNA的转录

高的性能：降低IVT过程中的副产物

检测无内切酶、外切酶、RNases

图1：不同片段长度的IVT 产量

不同片段长度的DNA ，在PCR仪上37℃孵育2h，然后用磁珠（Cat#12602）纯化。产量结果用NanoDrop分光光度计测定。

图2：转录得到的不同长度RNA用毛细管电泳图检测

44-4k nt RNA经Agilent检测，结果显示，电泳条带单一；峰型明显、锐利。

图3：不同Cap analog添加量下个指标的数值；

在如下反应条件进行测试：20ul，T7（250U)，NTP(10mM) ，37C 3h， LiCl沉淀；结果显示2.5mM及以上帽子添加量，综合性能相对比较好。

-25 ~ -15℃储存，有效期1年。

Q: T7酶的保真性能怎么样？有没有开展相关测试？

A: 我们的T7酶测试了相对保真度，与Thermo的保真度差不多，大概万分之四的突变率。目前野生型的T7保真度都差不多，基本能满足客户的需求。现项目中没有更高保真度T7的开发计划。

Q: 使用T7聚合酶的产量是使用LiCl纯化后进行测定的吗？有没有A260/280和A260/230的数据？

A: 是通过LiCl纯化后进行测定的，我们有记录过相关数据A260/280大概比值再在2.0-2.1之间；使用我们的羧基磁珠纯化也基本在这个范围以内。具体数据可以整理之后再分享。

Q: 采用T7聚合酶转录的时候，有没有什么办法，减少polyA尾多转录的问题？

A: 这一情况是T7反应体系的自身特性，无法完全避免。根据相关的文献，控制mRNA自延长的思路主要还是两方面：

①对模板3'末端上游序列进行优化；

②控制IVT产量，高产量下自我延伸的几率会更高