Hieff® Fast Cell Direct SYBR Green RT-qPCR Kit 适用于对各种动物细胞进行RNA提取(如cell line 化的贴壁细胞和悬浮细胞、原代培养细胞、各种干细胞、iPS 细胞等),无需提RNA,可直接进行qPCR表达分析,用时短,操作简单,出错率低,最短只需1.5小时就可高效完成从模板制备到反转录反应及基因表达分析等步骤。试剂盒中包含反转录以及荧光检测试剂,可轻松地进行基因表达分析。
产品组成
组分编号 | 组分名称 | 11172ES40 | 11172ES60 |
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11172-A | FCD Lysis Buffer | 2 mL | 5 mL |
11172-B | FCD Washing Buffer | 8 mL | 20 mL |
11172-C | FCD Stop Solution | 100 μL | 250 μL |
11172-D | DNase I | 80 μL | 200 μL |
11172-E | 4× Hifair® FCD RT Mix | 200 μL | 500 μL |
11172-F | 2× Hieff® FCD qPCR SYBR Master Mix | 2 mL | 5 mL |
11172-G | RNase Free H2O | 2 mL | 5 mL |
- 全仪器平台通用:预混特定类型参比染料,无需调整ROX浓度
- 便捷快速:最短1.5小时即可完成从RNA提取、反转录到qPCR的全过程
- 灵敏重复双保障:不同GC含量基因扩增更灵敏,重复性更好
- 耐异质性好:最高可耐受45%的裂解产物
- 高稳定性:试剂盒4℃可存放7天,可反复冻融50次
- 全仪器平台通用
图. 以293细胞为模板,使用11172ES进行测试,结果显示不同温度下存放多日△CT在0.5以内(△CT于±0.5以内,认为两者差异可忽略不计),具有良好的稳定性。
- 重复性灵敏度双保证
图. 以293悬浮细胞为模板,用太阳成集团11172ES(左列)、进口产品(右列)分别对细胞中30%、50%、70%GC含量的基因进行检测,结果显示针对不同GC含量的基因,11172ES的Ct均优于进口产品,重复性更好,更加灵敏。
图. 以293贴壁细胞为模板,用太阳成集团11172ES(左列)、进口产品(右列)分别对细胞中30%、50%、70%GC含量的基因进行检测,结果显示针对不同GC含量的基因,11172ES的Ct均优于进口产品,重复性更好,更加灵敏。
- 耐抑制性优良
图 .在11172ES反转录体系中分别加入4(20%),5(25%),6(30%),9(45%)的裂解产物(图a),结果显示11172ES反转组分具有优秀的耐抑制能力,反转录体系中最高可耐受45%的裂解产物。在11172ES定量体系中分别加入2(10%),4(20%),6(30%)的cDNA(图b),结果显示11172定量组分面对细胞裂解反准后得到的cDNA依旧具有优秀的耐抑制性,最高可耐受30%的cDNA产物。
- gDNA消化能力优秀
图. 在扩增体系中加入100ng-500ng gDNA, 使用太阳成集团11172ES、进口产品中DNase I组分进行gDNA去除。进行反转录,得到的cDNA 进行qPCR 定量分析。结果显示,不同gDNA 投入量条件下,11172ES消化能力优于进口产品。
- cDNA产物稳定性好
图. 以293细胞为模板,使用11172ES进行细胞裂解与反转录,将得到的cDNA 分别于-20℃、4℃、25℃、37℃放置3 d、7 d、14 d进行测试。将不同处理后的cDNA 进行qPCR 定量分析。cDNA 在各种条件下定量得到的△CT 均在0.5 范围内(△CT于±0.5以内,认为两者差异可忽略不计),具有良好的稳定性。
11172-A和 11172-B未开封时请置于-25~-15℃保存,融解后置于4℃保存,注意防止污染,其余组分长期保存时请于-25~-15℃保存,有效期6个月。
[1] Du X, Xu Q, Pan D, et al. HIC-5 in cancer-associated fibroblasts contributes to esophageal squamous cell carcinoma progression. Cell Death Dis. 2019;10(12):873. Published 2019 Nov 18. doi:10.1038/s41419-019-2114-z(IF:5.959)