本试剂盒是利用拓扑异构酶(Topoisomerase)高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：

1）快速，仅需 1-5 min即可完成连接反应；

2）高效，无自连，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；

3）操作简单，从连接到涂板仅需 15-20 min。操作过程省去冰浴、热激和1 h复苏；

4）可连接长达5 kb目的产物；

5）Hieff Clone® Zero TOPO-TA Simple Cloning Kit不含多克隆酶切位点(MCS)，在引入后续酶切位点进行酶切操作时，不会受到MCS位点的影响，从而增加酶切效率以及克隆成功率。

• 快速、高效、操作简单、后续不受MCS位点影响

冰袋运输。-20℃保存，避免反复冻融。有效期一年。

Q：TOPO 克隆和一步法克隆应用方面的区别？

A：TOPO 克隆主要用于构建克隆载体，应用于目的基因的复制，保存或测序等；一步法克隆可用于构建克隆或表达载体，点突变，多片段克隆等。

Q：TOPO 载体含有启动子吗？TOPO 载体是什么抗性？

A：没有启动子，因为TOPO 载体是克隆载体。氨苄抗性。

Q：载体能否提供全序列？客户实验能否用客户自己的载体？

A：a）可以提供全序列。

b）不能用客户的载体，试剂盒中已带有偶联TOPO 异构酶的载体。

Q：PCR 产物是否需要特殊处理？

A：无需特殊处理，但为了保证阳性率，最好进行胶回收纯化。

Q：平末端和 TA 克隆试剂盒的 Enhancer 能混合使用吗？

A：不建议混合使用。

Q：反应过夜可以吗？

A：不可以，TOPO 异构酶具有限制性内切酶活性，时间过长会重新切割重组质粒，建议反应时间不超过 5min。

Q：TOPO 载体最大可插入多大片段？能否插入多个片段？

A：a）验证过 5kb，一般片段越大，难度系数也会更高些。b）不能插入多片段，只能单个片段的插入。